Réaction d'Ouchterlony : immunoprécipitation du complexe antigène-anticorps 

Principe 

Ce TP montre la spécificité des anticorps. des anticorps anti-BSA (anti sérum albumine bovine) sont obtenus à partir du sérum d'un animal auquel on a injecté de l'albumine bovine (= BSA). Ils sont déversés par micropipette dans le puits central (1). Par ailleurs, sont déversés toujours par micropipette dans des tubes périphériques : un témoin positif contenant BSA (2) , un témoin négatif ne le contenant pas (3), un sérum complet de bovin (4), un sérum complet de lapin (5) et un sérum complet d'âne (6).

Ces sérums diffusent alors dans le milieu gélosé ; la vitesse de diffusion dépend de la taille des molécules. La reconnaissance anticorps-antigène conduit à la formation d'un complexe immun (complexe anticorps-antigène) qui bloque alors la migration et des antigènes et des anticorps ; ce complexe immun forme un arc de précipitation blanchâtre (il est difficile à photographier  et a été surligné ici en bleu.

Protocole

+ Matériel : différents sérum (2 à 6), solution d'anticorps (1), boîtes de Pétri avec gélose, une mire plastifiée (à placer sous les boîtes de Pétri), un emporte-pièce et une poire d'aspiration, un feutre (pour identifier les 5 puits périphériques), des micro-pipettes ou pipettes Pasteur, un feutre, une pissette d'eau distillée, un incubateur (réglé à 30°C). 

+ Perforer la gélose à l'aide de l'emporte-pièce pour former 6 puits (1 central et 5 périphériques) : la mire plastifiée placée sous la boîte de Pétri doit guider l'élève ; éjecter complètement la gélose des puits à l'aide des poires d'aspiration ; identifier les puits périphériques à l'aide d'un feutre en inscrivant le n° du puits sous la boîte de Pétri (de 2 à 6). 

+ Verser 15 microlitres de solution dans chacun des puits 1 à 6 (voir ci-dessus, la nature des 6 solutions) ; attention de ne jamais faire déborder les puits et éviter tout contact entre les solutions ; ne plus retourner les boîtes de Pétri à ce stade du travail. Un papier filtre humidifié à l'eau distillée est placé dans le couvercle de la boîte de Pétri et les boîtes, fermées par leur couvercle sont placées dans l'incubateur pendant 48h - voire 72h-  (les papiers filtres sont réhydratés une fois par jour).

+ Les arcs de précipitation (qui apparaissent sous forme d'un précipité blanchâtre) peuvent être colorés au bleu de Coomasie.  Ils peuvent être conservés au congélateur.